Đề tài Một số phương pháp sắc ký

L/O/G/O MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ www.themegallery.com NỘI DUNG SẮC KÝ LỌC GEL 5 SẮC KÝ BẢN MỎNG 2 SẮC KÝ GIẤY 3 SẮC KÝ TRAO ĐỔI ION 4 KHÁI NIỆM SẮC KÝ 1 www.themegallery.com KHÁI NIỆM Là quá trình tách dựa trên sự phân bố liên tục các cấu tử chất phân tử trên hai pha: - Pha tĩnh: Đứng yên có khả năng hấp thụ chất phân tích. - Pha động: Di chuyển qua pha tĩnh Các chất phân tích có ái lực khác nhau với pha tĩnh, chúng di chuyển với tốc độ khác nhau và tách ra khỏi nhau. www.themegallery.com PHÂN LOẠI Phương pháp sắc ký Sắc ký khí (GC) SK khí - rắn SK khí - lỏng Sắc ký lỏng (LC) HPLC SK Phẳng SK lớp mỏng SK giấy SK điện di mao quản SK phân bố lỏng - lỏng SK rắn - lỏng SK hấp phụ SK phân bố SK ion SK rây phân tử Hệ pha Cơ chế www.themegallery.com HỆ PHA Pha động có thể là một chất lỏng hay chất khí Pha tĩnh có thể là một chất rắn (hạt xốp hay bột mắn) hay một chất lỏng (được giữ trên một chất mang rắn). PHÂN LOẠI www.themegallery.com 3. Sắc ký trao đổi ion: pha tĩnh là chất nhựa trao đổi ion, cao phân tử có mang những ion có khả năng trao đổi với các ion cùng dấu của dung dịch hỗn hợp sắc ký. 1. Sắc ký hấp phụ: pha tĩnh là một chất rắn có khả năng hấp phụ, đó là các phương pháp sắc ký lỏng - rắn và khí - rắn. 2. Sắc ký phân bố: pha tĩnh là chất lỏng được bao trên bề mặt của một chất rắn là chất mang trơ, không hoà lẫn được với pha động - Bao gồm sắc ký lỏng - lỏng và sắc ký khí - lỏng. CƠ CHẾ 4. Sắc ký theo loại cỡ (rây phân tử): còn gọi là sắc ký trên gel. Các phân tử cỡ lớn sẽ được loạt các phân tử nhỏ hơn sẽ được tách theo kích thước do các phâ tử nhỏ di chuyển chậm hơn. PHÂN LOẠI www.themegallery.com - Tách dung dịch dựa trên tính phân cực của các thành phần trong dung dịch Là chất hấp phụ được trải thành lớp mỏng, mịn, đồng nhất trên phiến kính hoặc kim loại - Là một hay hỗn hợp nhiều dung môi phối hợp theo tỷ lệ nhất định - Hút lên bản sắc bởi mao dẫn PHA TĨNH BẢN SẮC KÝ PHA ĐỘNG PHÂN TÁCH KHÁI NIỆM SẮC KÝ BẢN MỎNG Trộn chất hấp phụ (silicagel) với chất trơ (calcium sulfate) và nước để tạo kết dính sau đó được trải trên bề mặt chất trơ (thủy tinh). www.themegallery.com SẮC KÝ BẢN MỎNG Nguyên tắc hoạt động - Giọt dịch mẫu được nhỏ trên đường xuất, rìa bản được nhúng vào dung môi. - Pha động di chuyển qua pha tĩnh trên đó đã được đặt chất cần phân tách. - Dưới lực mao quản dung môi chuyển động theo lớp hấp phụ mang theo cấu tử di chuyển với tốc độ khác nhau làm tách cấu tử www.themegallery.com SẮC KÝ BẢN MỎNG www.themegallery.com Ứng dụng của sắc ký bản mỏng - Xét nghiệm độ tinh khiết của các hóa chất phóng xạ trong dược khoa - Xác định các sắc tố trong tế bào thực vật - Phát hiện thuốc trừ sâu, thuốc diệt côn trùng trong thức ăn - Nhận biết những hóa chất trong một chất cho sẵn - Giám sát các phản ứng hữu cơ SẮC KÝ BẢN MỎNG www.themegallery.com SẮC KÝ GIẤY Nguyên tắc hoạt động - Tác động của mao dẫn - sự chuyển dịch của chất lỏng trong những lỗ hổng vật liệu xốp gây ra bởi lực bám, lực liên kết và sức căng bề mặt. - Các chất tan tan trong dung môi nhất định. Nên các chất tan khác nhau sẽ bị tách ra khi kết hợp nhiều dung môi khác nhau - Việc tách các chất dựa vào tính tan của nó trong pha động và ái lực khác nhau của chúng mới pha động và pha tĩnh. Khái niệm - Là loại sắc ký lỏng - lỏng. - Pha động là chất lỏng, là hỗn hợp của hai hay nhiều dung môi khác nhau. - Pha tĩnh lỏng được tẩm vào chất mang là giấy sắc ký www.themegallery.com SẮC KÝ GIẤY www.themegallery.com SẮC KÝ TRAO ĐỔI ION Khái niệm - Dựa trên cơ sở trao đổi ion giữa protein tan trong nước hoặc dung dịch đệm loãng và các tác nhân trao đổi ion. - Các chất giá trơ có bản chất cellulose hoặc sephadex kết hợp với nhóm ion hóa. + Cellulose-O-CH2-COOH: Phân ly cho ra COO- là chất trao đổi cation + Cellulose-O-C2H4-N-(C2H5)2 nhận ion H+ của nước tích điện dương www.themegallery.com SẮC KÝ TRAO ĐỔI ION www.themegallery.com SẮC KÝ LỌC GEL Khái niệm - Là phương pháp phổ biến dùng để tách chiết và tinh sạch protein. - Dựa vào sự khác nhau về kích thước, hình dạng và phân tử lượng của protein có trong hỗn hợp cần phân tách. Tính chất các loại gel - Phải là chất trơ, không phản ứng với enzyme. - Không hòa tan, tương đối bền với các yếu tố cơ học và sinh học - Không có tính đàn hồi (không co), ưa nước Gel Sephadex www.themegallery.com SẮC KÝ LỌC GEL Các bước tiến hành - Cho sephadex vào cột thủy tinh dài và cân bằng bằng dung dịch đệm có pH nhất định. - Cho enzyme vào cột - Các hạt nhỏ sẽ khuyết tán qua hạt sephadex bị trương phồng - Các hạt lớn không có khả năng đi vào mà lách nhanh qua các hạt sephadex và được chiết nhanh ra khỏi cột. www.themegallery.com Ứng dụng - Tách các chất có trọng lượng khác nhau có trong hỗn hợp - Loại muối thay cho quá trình thẩm tích - Sử dụng để cô đặc protein enzyme - Xác định khối lượng phân tử SẮC KÝ LỌC GEL www.themegallery.com SẮC KÝ LỌC GEL L/O/G/O www.themegallery.com Thank You!