Nghiên cứu phương pháp tách tế bào gan và thử nghiệm hoạt tính bảo vệ tế bào gan ex vivocủa cao chiết cây râu mèo

Gan là một cơquan quan trọng vềmặt chuyển hóa các chất của cơthể. Một trong những chức năng rất quan trọng của gan là tham gia vào quá trình giải ñộc các chất nội sinh và ngoại sinh. Trong các trường hợp bệnh lý hay sự quá tải các chất ñộc trong gan, các tế bào gan sẽ bị huỷ hoại dẫn tới các tổn thương trên gan dần dần dẫn tới các tổn thương không hồi phục, xơgan làm mất chức năng giải ñộc của gan [5]. Bệnh gan là một trong những vấn ñềthường gặp trong cộng ñồng. Có nhiều loại bệnh gan trong ñó thường gặp là những tổn thương gan gây ra bệnh viêm gan dẫn ñến xơ

9 trang | Chia sẻ: lamvu291 | Lượt xem: 1325 | Lượt tải: 1

Bạn đang xem nội dung tài liệu Nghiên cứu phương pháp tách tế bào gan và thử nghiệm hoạt tính bảo vệ tế bào gan ex vivocủa cao chiết cây râu mèo, để tải tài liệu về máy bạn click vào nút DOWNLOAD ở trên

Science & Technology Development, Vol 13, No.T3- 2010 NGHIÊN C U PH ƯƠ NG PHÁP TÁCH T BÀO GAN VÀ TH NGHI M HO T TÍNH B O V T BÀ O GAN EX VIVO C A CAO CHI T CÂY RÂU MÈO (1) (1) (2) (2) Nguy n Ng c H ng , Võ V ăn Giàu , Hu ỳnh Ng c Th y , Tr n Hùng , H Hu ỳnh Thùy D ươ ng (3) (1) Tr ưng Đ i h c Tôn Đ c Th ng; (2) Tr ưng Đ i h c Y d ưc TP.HCM (3) Tr ưng Đ i h c Khoa h c T nhiên, ĐHQG-HCM (Bài nh n ngày 19 tháng 06 năm 2009, hoàn ch nh s a ch a ngày 01 tháng 11 n ăm 2010) TÓM T T: Cây Râu mè o (Orthosiphon aristatus Blume) là mt cây thu c ñư c s d ng r ng rã i trong y h c dân gian Vi t nam và nhi u n ư c trên th gi i nh ư là mt thu c l i ti u. Trong cá c nghiên cu tr ư c ñây c a chúng tôi ñã nh n th y tá c d ng ch ng oxy hoá m nh c a cao chi t cây Râu mèo trên cá c mô hì nh th nghi m in vitro nh ư ferric reducing/antioxidant power và 1,1-diphenyl-2-picryl- hydrazyl. Trong nghiên c u này, tá c d ng b o v t bà o gan ex vivo c a cao chi t Râu mè o ch ng l i tá c d ng gây ñc trên t bà o gan c a carbon tetrachlorid (CCl 4) trong mô hình gây t n th ươ ng t bào gan chu t t ách r i ñư c th c hi n nh m ñánh giá mi t ươ ng quan gi a ñc tí nh ch ng oxy hoá và tá c d ng b o v gan c a Râu mèo. Mô hình ñư c s d ng là mô hì nh tách t bào c a Kiso có thay ñ i m t s b ưc cho phù h p v i ñiu ki n hi n t i c a phòng thí nghi m. T bào ñơ n sau khi tách ñưc ph c hi v i th i gian 2 gi trong môi tr ưng E’MEM có b sung m t s ch t c n thi t cho t bào, sau ñó gây ñc t bào b ng CCl 4 1,5% trong th i gian 45 phú t làm t ăng cao ho t ñ c a enzym ALT trong môi tr ưng. Kt qu th nghi m cho th y cao chi t methanol cây Râu mèo các n ng ñ khác nhau ñ u có tác d ng h enzym gan, bo v t bào nh ưng v i cá c mc ñ khá c nhau. nng ñ 0,1 và 0,25 mg/ml ca cao chi t methanol có kh năng là m gi m 60 % nng ñ ALT so v i nhóm ch ng ñc, ñư a n ng ñ ALT v cò n 104 % so v i nhó m ch ng tr ng. T các k t qu thu ñưc, có th k t lu n là cao chi t methanol c a cây Râu mèo có tác d ng t t trong vi c b o v t bà o gan ch ng l i tá c d ng ñc c a carbon tetrachlorid, có nhi u tri n v ng trong vi c s d ng phòng ng a các b nh v viêm gan c p tính. Keywords: Hepatocytes, Orthosiphon aristatus, CCl 4, hepatoprotective effect 1. ĐT V N Đ bà o gan s b hu ho i d n t i cá c t n th ươ ng Gan là m t c ơ quan quan tr ng v m t trên gan d n d n d n t i cá c t n th ươ ng không chuy n hóa các ch t c a c ơ th . Mt trong hi ph c, xơ gan là m m t ch c n ăng gi i ñc nh ng ch c n ăng r t quan tr ng c a gan là c a gan [5]. B nh gan là m t trong nh ng v n tham gia vào quá trì nh gi i ñc các ch t n i ñ th ưng g p trong c ng ñ ng. Có nhi u lo i sinh và ngo i sinh. Trong cá c tr ư ng h p b nh bnh gan trong ñó th ưng g p là nh ng t n lý hay s quá t i cá c ch t ñc trong gan, cá c t th ươ ng gan gây ra b nh viêm gan d n ñ n x ơ Trang 58 Bn quy n thu c ĐHQG-HCM TP CHÍ PHÁT TRI N KH&CN, T P 13, S T3 - 2010 gan và ung th ư gan cu i cùng là gây t d ng b o v gan, trong nghiên c u này chúng vong v i nguyên nhân ch y u là do virút và tôi s d ng mô hình t bào gan tá ch r i gây nhi m ñ c. Ph n l n các ch t gây ñ c cho gan nhi m ñ c b i carbon tetrachlorid (CCl 4) vi có liên quan t i s peroxid hóa lipid và các mt s nh ng thay ñ i cho phù h p v i ñiu stress oxy hóa [1]. ki n hi n t i c a phòng thí nghi m ñ ñánh giá Hi n nay, cá c th nghi m ch ng oxy hoá tá c d ng b o v gan c a cao chi t methanol c a in vitro và cá c th nghi m trên t bà o gan ex cây Râu mèo. vivo th ư ng ñưc dùng ñ ñánh giá tá c d ng 2. V T LI U VÀ PH ƯƠ NG PHÁP b o v gan c a các d ư c li u, cá c cao chi t và 2.1. Hóa ch t phân ñon c a d ư c li u. Cá c th nghi m nà y Collagenase (Type I) (Gibco), dimethyl có ưu ñim là nhanh, kt qu lp l i, có th áp sulfoxide (DMSO) và trypan blue (Merck), d ng ñ sàng l c m t s lư ng m u l n trong Phosphate Buffered Saline (PBS) (Oxoid), th i gian ng n v i chi phí th p, s d ng m t albumin huy t thanh bò, môi tr ưng Eagle's lưng m u nh . Cá c th nghi m ex vivo có ưu minimal essential medium (E’MEM), huy t ñim là gn v i h th ng sinh h c h ơn nên thanh bào thai bò, dexamethasone, insulin th ư ng ñư c dù ng nh ư nh ng th nghi m sà ng (Sigma), kit th alanine aminotransferase l c tr ư c cá c th nghi m in vivo . Trong th (ALT) (Diagnosticum Zrt). Các hóa ch t khác nghi m trên cá c t bà o gan tá ch r i, ph ươ ng ñt tiêu chu n phân tích. phá p c a Kiso ñưc s d ng vì có ưu ñim là 2.2. V t li u nhanh và môi tr ưng, hóa ch t ñơn gi n. Ph n trên m t ñt c a cây Râu mèo ñưc Cây Râu mè o (Orthosiphon aristatus thu mua t i Th Đ c, Thành ph H Chí Minh Blume, h Hoa môi - Lamiaceae) là mt cây và o thá ng 4 n ăm 2007. M u ñưc xác ñ nh thu c ñư c s d ng r ng rã i trong y h c dân bng vi c kh o sát ñc ñim hình thái th c v t gian Vi t Nam và nhi u n ư c trên th gi i nh ư hc d a trên quan sát cây t ươ i. D ưc li u ñưc là mt thu c l i ti u, ñiu tr viêm th n, s i ra s ch, ph ơi trong bóng râm ñn khô, xay th n, s i m t, tê th p, ñau nh c, b nh Goutte nh làm nguyên li u cho quá trình chi t thu [2, 8] và ñiu tr b nh ti u ñưng [6]. Trong cao. cá c nghiên c u tr ư c ñây, chúng tôi ñã nh n th y tá c d ng ch ng oxy hoá m nh c a cao Chu t nh t (ch ng Swiss albino) ñưc chi t methanol c a cây nà y trên cá c mô hì nh mua t Vi n Vaccin và Sinh ph m Nha Trang, th nghi m in vitro nh ư ferric ñưc nuôi và th ti phòng thí nghi m D ưc lý, reducing/antioxidant power và 1,1-diphenyl-2- Khoa D ưc – ĐH Y D ưc TP. HCM. picryl-hydrazyl [7]. 2.3. Ph ươ ng pháp nghiên c u Đ ñánh giá mi liên h gi a tá c ñng Chu n b m u th : 50 g d ư c li u ñư c ch ng oxy hoá c a cao chi t Râu mè o v i tá c ngâm trong dichloromethan trong 24 ti ng, sau Bn quy n thu c ĐHQG-HCM Trang 59 Science & Technology Development, Vol 13, No.T3- 2010 ñó ñun h i l ưu cách thu nhi t ñ 40 oC trong enzyme ALT trên t t c các m u. Ch n th i 3 gi , l c nóng, chi t l p l i ñ n khi gi t d ch ñim mà ho t l c enzyme cao nh t ñ làm thí chi t không ñ l i c n, g p các d ch chi t, thu nghi m. hi dung môi ñ thu cao dichloromethan. Bã Th nghi m sàng l c tác d ng làm h dưc li u ñưc lo i s ch dung môi và ti p t c enzym gan c a cao chi t Râu mèo trên mô hình ñưc chi t b ng cách ñun h i l ưu cách th y v i t bào gan chu t nhi m ñ c CCl 4: t bào gan o dung môi methanol 60 C trong 3 gi , l c chu t sau khi tách ñưc ph c h i trong 2h nóng, chi t ki t, g p các d ch chi t, thu h i ñiu ki n nêu trên, sau ñó ti n hành gây ñc t dung môi ñ thu ñưc cao methanol. bào b ng CCl 4 và b sung các n ng ñ khác Tách t bào gan: theo ph ươ ng pháp mô t nhau c a cao chi t Râu mèo (m u th ) vào t ca Kiso và c ng s (1983) [3] v i m t s bào ñ ki m tra ho t ñ enzym gan ALT. Ti n nh ng thay ñ i cho phù h p v i ñiu ki n hành song song các th nghi m là m u ch ng phòng thí nghi m. tr ng không gây ñ c và m u gây ñ c nh ưng T bào ñơ n sau khi tách ñáp ng ñưc m t không dùng thu c th nghi m ñ ñánh giá so ñ t bào t i thi u (>10 5 t bào/ml) s ñưc sánh k t qu . huy n phù trong môi tr ưng E’MEM b sung Đánh giá k t qu : ño ho t tính c a enzym huy t thanh bào thai bò (10%), dexamethasone gan ALT theo ph ươ ng pháp ño c a nhà s n (10 -6M), insulin (10 -8M), gentamycin (50 µg/L) xu t (Diagnosticum) phân b ñ u trong các ng ependorff 0,5 ml và 3. K T QU VÀ TH O LU N 0 ñiu ki n 95% O 2 và 5% CO 2, 37 C trong 2 3.1. Chu n hóa quy trình tách t bào gi ñ ph c h i sau quá trình tách. Ti n hành tách t bào gan chu t theo Kh o sát n ng ñ CCl 4 và th i gian t ph ươ ng pháp tách t bào gan chu t c a Kiso và bào thích h p cng s [3], tuy nhiên vi c b ơm r a gan b ng • Ti n hành th ăm dò n ng ñ CCl t i thi u 4 ñưng t ĩnh m ch ch trên không th c hi n có th dùng gây ñc t bào, phóng thích enzyme ñưc và b ơm r a gan b ng dung d ch có b gan ñ ñ kh o sát s thay ñ i c a enzyme trong sung collagenase c ũng không th th c hi n do quá trình th nghi m. Pha CCl v i 1% DMSO và 4 vn ñ kinh phí. Vì v y, chú ng tôi ñã ti n hà nh nưc c t ñ có dãy n ng ñ CCl là 1,0%; 1,5% và 4 th ăm dò thay ñi m t s b ưc th c hi n cho 2,0%. Ch n n ng ñ CCl thích h p ñ s d ng 4 phù h p v i ñiu ki n có ñưc trong phòng thí cho th nghi m. nghi m hi n t i và rút ra qui trình c th nh ư • Thăm dò th i gian t bào v i CCl 4 sau: thích h p, dò tìm th i ñim ho t ñ enzym gan - Chu t sau khi ñt ñn tr ng l ưng yêu c u tăng cao nh t b ng cách tin hành t bào (20 – 25g) s ñưc gây mê b ng ether. b ng trong th i gian 90 phút, trong th i gian , c ñưc m ra ñ b c l các c ơ quan bên trong, các c ơ mi 15 phút hút d ch nuôi c y ñi ño ho t l c Trang 60 Bn quy n thu c ĐHQG-HCM TP CHÍ PHÁT TRI N KH&CN, T P 13, S T3 - 2010 quan c a h tiêu hóa nh ư d dày, ru t ñưc kéo T bào ñơ n sau khi ñưc tách, ti n hành sang m t bên ñ có th quan sát t ĩnh m ch c a gan. xác ñnh m t ñ t bào và t l sng, ch t b ng Dùng ch lu n qua và c t c ñnh t ĩnh m ch ch cách nhu m t bào b ng trypan blue 0.4%. Sau phía trên ng c. C t t ĩnh m ch ch d ưi t i v trí khi nhu m t bào b ng trypan blue, ñ m t bào tĩnh m ch d ưi th n ñ t o ñưng thoát d ch cho ch t, ghi nh n t bào s ng trên bu ng ñm vi c b ơm r a gan. Đâm kim lu n vào trong t ĩnh Neubauer. K t qu cho th y t bào gan sau khi mch c a gan, dùng ch c t c ñnh ng lu n v i ñưc tách v i t l s ng cao ñưc trình bày tĩnh m ch c a. Dùng PBS b ơm vào ng lu n t ĩnh trong b ng 1 mch ñ r a gan. R a cho ñn khi gan chuy n Huy n phù t bào trong môi tr ưng nuôi sang màu vàng nh t ho c cho ñn khi dung d ch E’MEM có b sung 10% huy t thanh bê, 10 -7 PBS ch y ra t t ĩnh m ch thân d ưi không còn M insulin, 1% DMSO. t bào 2 gi trong t o màu ñ. t bào ñiu ki n 37 C, 5% CO 2/95% O 2. T - Gan sau khi ñưc r a s ñưc tách ra kh i bào tách ñưc s ti p t c ñưc s d ng nghiên cơ th chu t và ñưc gi trong dung d ch PBS có cu theo các h ưng khác nhau. ch a kháng sinh r i nhanh chóng chuy n vào t Vi c chu n hóa quá trình phân l p và tách cy vô trùng. T i ñây gan s ñưc r a l i b ng PBS t bào gan ñưc thay ñ i m t s b ưc nh ư sau: không có ch a kháng sinh. Gan ñưc ngâm ng p − B qua giai ñon truy n enzym trong dung d ch collagenase 0,075%, l c 100 collagenase vào bu ng gan thay vào ñó là o vòng/phút b ng máy l c trong 5 phút 37 C. Dùng ngâm h n bu ng gan trong m t th tích dung 2 k p m nh nhàng vu t t ng lá gan phân tán các dch enzym Collagenase nh t ñ nh v i th i gian t bào (luôn luôn gi các lá gan chìm trong dung nh t ñ nh dch collagenase 0,075%). K t qu ñt ñưc sau − Kt h p th i gian ngâm bu ng gan trong quá trình này là t o dung d ch huy n phù tr ng ñc. dung d ch enzym và th i gian l c ti p xúc Dung d ch huy n phù ñưc này ñưc l c ti p 100 enzym v i bu ng gan, gi m th i gian tách t vòng/phút, trong 10 phút 37 oC. C c ñng dung bào. dch huy n phù ñưc ñ t l nh 15 phút. L c dung So sánh v i qui trình c a Kiso, qui trình dch huy n phù qua g c-cotton vô trùng. Sau ñó này có nh ng ưu ñim: thu l y d ch ch a t bào ñơ n, ly tâm 1500 o − Do b qua giai ñon truy n collagenase vòng/phút trong 15 phút 37 C. Thu l y c n t liên t c vào bu ng gan, ti n hành ngâm th ng bào. R a c n t bào b ng d ng d ch PBS không có gan vào dung d ch enzym collagenase nên gi m ch a kháng sinh ñ lo i b collagenase. Ly tâm o ñáng k l ưng collagenase s d ng, gi m ñáng 1500 vòng/phút trong 15 phút 37 C thu l y t k chi phí cho th nghi m và ñơ n gi n hóa qui bào. Quá trình này l p l i t 3 – 5 l n n u còn h ng trình cu. (R a – l c – ly tâm) Bn quy n thu c ĐHQG-HCM Trang 61 Science & Technology Development, Vol 13, No.T3- 2010 − Th i gian th c hi n nhanh t 10-15 phút vi c ph i l p l i nhi u l n giai ñon r a gan, nên h n ch t l t bào gan b ch t. ñiu này d n ñ n t l t bào gan ch t cao, m t Vi k t qu nh ư trên, chúng tôi có th ñ t bào s ng th p. nh n ñ nh là k t qu tách t bào t t và n ñ nh. Nh n xét b ưc r a gan r t quan tr ng. N u r a gan không k thì h ng c u còn nhi u d n ñ n Bng 1 . K t qu tách t bào ñơ n b ng enzyme collagenase type I Mt ñ t bào S t bào s ng Ln th c hi n T l (%) (t bào/ml) (t bào/ml) Ln 1 79,7.10 5 77,8.10 5 97,6 Ln 2 88,1.10 5 83,6.10 5 94,9 Ln 3 59,3.10 5 54,6.10 5 92,1 Trung bình 75,7.10 5 71,9.10 5 94,8 3.2. Kh o sát n ng ñ gây ñc c a CCl 4 Kt qu kh o sát vi c s d ng các n ng ñ và th i gian thích h p CCl 4 khác nhau (1,0; 1,5; 2,0%) và tìm th i CCl 4 là m t ch t ñ c ñưc s d ng ph gian thích h p trong kho ng th i gian 90 phút bi n trong mô hình th nghi m gây t n th ươ ng ñưc trình bày trong hình 1. K t qu cho th y gan ex vivo và in vivo . Ch t này gây nên s x ơ nng ñ 1,0 và 1,5%, l ưng enzym gan ti t ra hóa gan và làm thay ñi các ch s sinh hóa c a môi tr ưng t ăng theo th i gian t 15 phút gan v i các tri u ch ng t ươ ng t v i viêm gan ñn 45 phút và gi m d n th i gian 75 phút và do virút c p tính [4, 9]. Khi t bào b t n 90 phút trong khi n ng ñ 2,0% CCl 4, ho t th ươ ng các enzym transaminsase nh ư ALT... ñ enzym gan t ăng d n trong kho ng 15-30 ti t ra môi tr ưng làm cho ho t ñ ALT ño phút và gi m d n trong kho ng 45-90 phút. ñưc trong môi tr ưng t ăng. Ng ưi ta ti n hành Ho t ñ enzym gan ño ñưc cao nh t và n ño ho t l c các men này ñ ñánh giá m c ñ ñnh nh t là n ng ñ CCl 4 1,5% v i th i gian th ươ ng t n t bào gan. 45 phút. Trang 62 Bn quy n thu c ĐHQG-HCM TP CHÍ PHÁT TRI N KH&CN, T P 13, S T3 - 2010 500 CCl4 1,0% 450 CCl4 1,5% 400 CCl4 2,0% 350 300 ALT (IU/L) ALT 250 ñ 200 t 150 Ho 100 50 0 0 20 40 60 80 100 Th i gian CCl4 (phút) Hình 1 . nh h ưng c a n ng ñ CCl 4 và th i gian ñ n s thay ñ i enzym gan c a môi tr ưng nuôi t bào Vi k t qu trên, ch n n ng ñ gây ñ c 3.3. Kh o sát tác d ng h enzyme gan ca CCl 4 là 1,5% và th i gian gây ñc t bào là trên mô hình t bào gan chu t b nhi m ñ c 45 phút làm thông s ñ th c hi n thí nghi m CCl 4 c a cao chi t cây Râu mèo sàng l c tác d ng b o v gan ex vivo . Tác d ng b o v gan c a cao methanol cây Râu mèo ñưc trình bày trong hình 2. 250 200 150 ALT (U/L) ñ 100 t t Ho 50 0 1 2 3 4 5 6 Nhóm Hình 2 . Ho t tính b o v gan exvivo c a cao chi t cây Râu mèo các n ng ñ khác nhau ch ng l i ch t ñ c CCl 4 gây ñc cho gan thông qua ho t ñ ALT ño ñưc trong môi tr ưng Nhóm 1: nhóm ch ng tr ng (t bào ch ưa b nhi m ñ c); Nhóm 2: M u ñ c (t bào b gây ñ c b i CCl 4); Nhóm 3, 4, 5, 6: nhóm th nghi m có dùng thu c sau khi gây ñ c. Các nhóm th nghi m 3, 4, 5, 6 th t các n ng ñ 0,05; 0,1; 0,25 và 0,5 mg/ml Bn quy n thu c ĐHQG-HCM Trang 63 Science & Technology Development, Vol 13, No.T3- 2010 Nhóm ñc cho k t qu ho t ñ enzym gan nghi m l p l i ñ u cho k t qu t ươ ng t , chúng tăng 264 % so v i nhóm ch ng tr ng (t bào tôi nh n ñ nh có th do t bào ít nhi u b tr ưc khi CCl 4) khi t bào gan n ng ñ th ươ ng t n, và do th i gian th nghi m quá 1,5% CCl 4 trong kho ng th i gian 45 phút. K t ng n (ch trong vòng 45 phút) nên các th ươ ng qu cho th y nhóm th các n ng ñ khác tn t bào do quá trình r a tách ch ưa h i ph c nhau c a cao chi t cây Râu mèo (0,05; 0,1; hoàn toàn. Đ k t qu t t h ơn nên kéo dài th i 0,25 và 0,5 mg/ml) ñu có tác d ng làm h gian h i ph c c a t bào sau khi tách và nuôi enzym gan, b o v gan. Tuy nhiên, nhóm th cy r i m i ñưa vào th nghi m. 6 (có n ng ñ 0,5 mg/ml) cho k t qu h 4. K T LU N enzym gan y u nh t v i ho t ñ enzym gan là Đã ñ ngh ñưc m t s b ưc chu n hóa 156 ± 9 U/L ch gi m 23% so v i nhóm ch ng qui trình tách t bào gan ñ th nghi m sàng ñc. n ng ñ 0,1 và 0,25 mg/ml c a cao lc b o v t bào gan ex vivo , t bào gan thu chi t Râu mèo (nhóm 4, 5) ñu cho tác d ng h ñưc có th ñưc dùng cho các nghiên c u enzym gan m nh nh t, vi ho t ñ l n l ưt là khác nh ư nuôi c y t bào gan và sàng l c sinh 80 ± 12 U/L và 81 ± 7 U/L gi m kho ng 60% hc cho các m u th nghi m. N ng ñ gây ñ c so v i nhóm ch ng ñ c, ñư a n ng ñ ALT v ca CCl 4 là 1,5%; th i gian th nghi m 45’ cò n 104% so v i nhó m ch ng tr ng. ñưc dùng làm thông s cho nghiên c u sàng T các k t qu thu ñưc trong th nghi m lc b o v gan c a các cao chi t, phân ñon này có th k t lu n là cây Râu mèo có tác d ng hay các ch t tinh khi t c a nghiên c u chúng h enzym gan theo k t qu th nghi m ex vivo. tôi. Qua ph n th nghi m ex vivo cho th y cao Cũng t k t qu này cho th y s t ươ ng quan methanol c a cây Râu mèo có tác d ng ch ng gi a ñ c tính ch ng oxy hóa m nh c a cao li ch t ñ c, làm h enzym gan, b o v t bào chi t methanol c a cây Râu mèo có vai trò gan có hi u qu. Nh ư v y, cao methanol c a quan tr ng trong vi c b o v t bào ch ng l i cây Râu mèo s ñưc nghiên c u sâu h ơn qua ch t ñ c gây t n th ươ ng t bào. nghiên c u tác d ng b o v gan in vivo c ũng Nh n xét nhóm ch ng tr ng ho t ñ nh ư phân l p các ch t tinh khi t có tác d ng enzyme ñu cao h ơn m c bình th ưng, các th bo v gan trong phân ñon này. Trang 64 Bn quy n thu c ĐHQG-HCM TP CHÍ PHÁT TRI N KH&CN, T P 13, S T3 - 2010 HEPATOCYTE ISOLATION AND EX VIVO HEPATOPROTECTION OF ORTHOSIPHON ARISTATUS EXTRACT ON CARBON TETRACHLORIDE INDUCED HEPATOTOXICITY Nguyen Ngoc Hong (1) , Vo Van Giau (1) , Huynh Ngoc Thuy (2) , Tran Hung (2) Ho Huynh Thuy Duong (3) (1) Ton Duc Thang University (2)University of Medicine and Pharmacy-Ho Chi Minh City (3) University of Sciences, VNU-HCM ABSTRACT: Orthosiphon aristatus Blume, a member of the Lamiaceac family, is a medicinal herb known useful as a diuretic agent, used popularly in Vietnam and the nations in the world. In our previous research, it is found that O. aristatus had strong antioxidant in both methods of the ferric reducing/antioxidant power assay and the 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl free radical scavenging assay. The purpose of the present study was to examine the methanolic extract of O. aristatus with strong antioxidative activity against carbon tetrachloride (CCl 4) induced cytotox