Tổng hợp, xác định cấu trúc các dẫn chất quang hoạt N-heptyl và N-benzyl của cis (+); cis(−)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinon có tác dụng sinh học

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011 Nghiên cứu Y học Chuyên Đề Dược Khoa 359 TỔNG HỢP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC DẪN CHẤT QUANG HOẠT N-HEPTYL VÀ N-BENZYL CỦA CIS (+); CIS (−)-4-(3,4-DIMETHOXYPHENYL) HEXAHYDRO PHTHALAZINON CÓ TÁC DỤNG SINH HỌC Chương Ngọc Nãi*, Trương Ngọc Quỳnh Nhi**, Nguyễn Ngọc Vinh*, Nguyễn Đức Tuấn**, Đặng Văn Tịnh** TÓM TẮT Đặt vấn đề: Những năm gần đây, hoạt tính ức chế chọn lọc phosphodiesterase IV (PDE4) được phát hiện ở các dẫn chất thế N-alkyl của phthalazinon. Bên cạnh đó, nhiều công trình nghiên cứu trong và ngoài nước đã khảo sát thành công quy trình tổng hợp các dẫn chất cis-N-alkyl phthalazinon có tác dụng ức chế chọn lọc phosphodiesterase IV và tác dụng kháng viêm mạnh. Để tiếp tục công trình nghiên cứu, chúng tôi thực hiện tổng hợp các dẫn chất quang hoạt N-heptyl và N-benzyl của cis(+); cis(-)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinon, đồng thời thực hiện phương pháp xác định cấu trúc các sản phẩm sau tổng hợp. Mục tiêu nghiên cứu: Nhằm tiếp tục đóng góp vào công trình nghiên cứu tổng hợp các dẫn chất quang hoạt phthalazinon có tác dụng ức chế chọn lọc (PDE4) và tác dụng kháng viêm mạnh, chúng tôi tiến hành tổng hợp các dẫn chất quang hoạt N-heptyl và N-benzyl của cis(+); cis(-)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinon. Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Tiến hành tổng hợp các dẫn chất quang hoạt N-heptyl và N- benzyl của cis(+); cis(-)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinon. Thực hiện các phương pháp xác định cấu trúc và kiểm tra độ tinh khiết quang học các sản phẩm tổng hợp được. Kết quả: Đã tổng hợp thành công các dẫn chất N-heptyl và N-benzyl của cis(+); cis(-)-4-(3,4- dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinon có tiềm năng sinh học. Kết luận: Quy trình tách acid carboxylic dạng racemic sử dụng tác nhân bất đối xứng là base tinh khiết về mặt quang học (R)-(+) và (S)-(−)-α-methylbenzylamin thu được sản phẩm là acid carboxylic có tính quang hoạt với độ tinh khiết quang học cao. Từ đó, tiến hành tổng hợp và xác định cấu trúc các dẫn chất N-heptyl và N- benzyl của cis(+); cis(-)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinon. Từ khóa: cis(+); cis(-)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinon, kháng viêm, ức chế phosphodiesterase. ABSTRACT SYNTHESIS, STRUCTURE DETERMINATION OF NEW CHIRAL DERIVATIVES N-HEPTYL AND N-BENZYL CIS (+); CIS (−)-4-(3,4-DIMETHOXYPHENYL) HEXAHYDRO PHTHALAZINONE WITH POTENTIAL BIOLOGICAL ACTIVITIES Chuong Ngoc Nai, Truong Ngoc Quynh Nhi, Nguyen Ngoc Vinh, Nguyen Duc Tuan, Dang Van Tinh * Y Hoc TP. Ho Chi Minh* Vol. 15 - Supplement of No 1 - 2011: 359 - 364 Introduction: In recent years, the selective phosphodiesterase IV (PDE4) inhibitory activity was found in the N-alkyl phthalazinone derivatives. Besides, much research at home and abroad has been surveyed successfully *Viện Kiểm nghiệm thuốc TP. Hồ Chí Minh **Khoa Dược, Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS TS Đặng Văn Tịnh ĐT: 0909382233 Email: vantinhdang62@yahoo.com.vn Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011 Chuyên Đề Dược Khoa 360 the process synthesis cis-N-alkyl phthalazinone derivatives with selective inhibitory effects on phosphodiesterase IV (PDE4) and strong anti-inflammatory activity. To continue the research, the new chiral derivatives N-heptyl and N-benzyl cis(+); cis(-)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinone were synthesized and determinated the structure. Aims: To continue contributing to the research of the synthesis of new chiral phthalazinone derivatives with selective inhibitory effects on phosphodiesterase IV (PDE4) and strong anti-inflammatory activity, the new chiral derivatives N-heptyl and N-benzyl cis(+); cis(-)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinone were synthesized. Objects and Methods: Synthesize new chiral derivatives N-heptyl and N-benzyl cis(+); cis(-)-4-(3,4- dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinone. Determine the structure and specifications of the synthesized products. Results: Successfully synthesized the new chiral derivatives N-heptyl and N-benzyl cis(+); cis(-)-4-(3,4- dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinone with potential biological activities. Conclusions: The optical resolution of racemic carboxylic acid gave chiral of carboxylic acids with high optical purity by using R)-(+) and (S)-(−)-α-methylbenzylamine, which are pure chiral bases. Then the chiral derivatives N-heptyl and N-benzyl cis(+); cis(-)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinone were synthesized and determinated the structure. Keywords: cis(+); cis(-)-4-(3,4-dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinon, anti-inflammatory activity, phosphodiesterase inhibitory. ĐẶT VẤN ĐỀ Những năm gần đây, hoạt tính ức chế chọn lọc phosphodiesterase IV (PDE4) trong điều trị bệnh viêm cấp tính và mạn tính như bệnh viêm khớp dạng thấp và bệnh hen suyễn được phát hiện ở các dẫn chất thế N-alkyl của phthalazinon(5,6). Hiện nay, có nhiều công trình nghiên cứu trong và ngoài nước đã khảo sát tổng hợp thành công các dẫn chất cis-N-alkyl phthalazinon với tác dụng ức chế chọn lọc PDE4 và tác dụng kháng viêm mạnh hơn dẫn chất trans(2). Tuy nhiên các đồng phân hữu tuyền có hoạt tính ức chế chọn lọc PDE4 mạnh hơn đồng phân tả tuyền và dạng racemic(1,3,4), do đó để tiếp tục công trình nghiên cứu, chúng tôi thực hiện tổng hợp các dẫn chất quang hoạt N-heptyl và N-benzyl của cis(+); cis(-)-4-(3,4- dimethoxyphenyl) hexahydro phthalazinon, đồng thời thực hiện phương pháp xác định cấu trúc các sản phẩm sau tổng hợp. ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Trang thiết bị, hóa chất, dung môi Trang thiết bị Bếp khuấy từ gia nhiệt Ika C-Mag HS7, cân kỹ thuật EK-610i, cân phân tích Mettler Toledo AB 265-S (Thụy Sĩ), máy cô quay Büchi (Thụy Sĩ), máy đo góc quay cực Horiba SEPA-300 (Nhật Bản), máy đo điểm chảy Büchi B545 (Thụy Sĩ), máy quang phổ hồng ngoại FTIR Magna-IR 760 Spectrometer Nicolet (Mỹ), máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Shimadzu LC 20A (Nhật Bản)máy sắc ký lỏng ghép khối phổ Agilent 6410 Triple Quad (Mỹ), máy cộng hưởng từ hạt nhân Bruker 500, cột sắc ký Gemini C18 (250 x 4,6 mm, 5 µm) (Mỹ), cột Lux Cellulose-1, 250 x 4,6 mm, 5µm (Mỹ). Hóa chất, dung môi Silica gel 60 (0,040-0,063 mm), bản mỏng silica gel 60 F254 tráng sẵn (Merk). 1,2- dimethoxybenzen, nhôm clorid, (R)-(+) và (S)- (−)- -methylbenzylamin (Merck). Benzyk bromid, cis-1,2-cyclohexan dicarboxylic Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011 Nghiên cứu Y học Chuyên Đề Dược Khoa 361 anhydrid (Aldrich); calci clorid, hydrazin monohydrat, natri bicarbonat, natri clorid, natri hydrid 60%, natri sulfat khan (Trung Quốc) dùng cho tổng hợp; acid hydroclorid (Merck). Cloroform, diethyl ether, ethanol tuyệt đối, ether dầu hỏa, ethyl acetat, isopropanol, methanol, n- hexan (J.T.Baker), N,N-dimethylformamid (Prolabo) dùng cho phân tích. Phương pháp tổng hợp Quy trình tổng hợp được thiết kế như sau: O O O H H AlCl3, CH2Cl2, 50-60 oC O COOH H H 2 H3CO H3CO H3CO H3CO 1 O COOH O COOH 2a 2b H3CO H3CO H3CO H3CO 1. R(+)-α-methylbenzylamin/ EtOH 1. S(-)-α-methylbenzylamin/ EtOH 2. H+ 2. H+ Hình 1. Sơ đồ tổng hợp acid cis-2-(3,4-dimethoxybenzoyl)cyclohexan carboxylic có tính quang hoạt N N N O R 3a 4a, 4b H3CO H3CO H3CO H3CO N O H O COOH2a H3CO H3CO R-Br NaH, DMF H2N NH2 EtOH, 130-140 oC 4a: R-: n-C7H15- 4b: R-: C6H5-CH2- Hình 2. Sơ đồ tổng hợp các dẫn chất thế cis(−) N-alkyl hexahydro phthalazinon N N O R 4c, 4d H3CO H3CO R-Br NaH, DMF H2N NH2 EtOH, 130-140 oC O COOH 2b H3CO H3CO N 3b H3CO H3CO N O H 4c: R-: n-C7H15- 4d: R-: C6H5-CH2- Hình 3. Sơ đồ tổng hợp các dẫn chất thế cis(+) N-alkyl hexahydro phthalazinon Các giai đoạn thực hiện - Tổng hợp nguyên liệu acid cis-2-(3,4- dimethoxybenzoyl)cyclohexan carboxylic dạng racemic từ anhydrid cis-1,2-cyclohexan dicarboxylic và 1,2-dimethoxybenzen. - Đóng vòng acid carboxylic vừa tổng hợp được với hydrazin tạo phthalazinon dạng racemic có tính kháng viêm. - Từ acid carboxylic dạng racemic trên, tiến hành tách đồng phân quang học bằng (R)-(+) và (S)-(−)-α-methylbenzylamin. - Đóng vòng 2 đồng phân quang học riêng lẻ trên tạo phthalazinon có tính quang hoạt. - Thế các alkyl vào vị trí N- của phthalazinon với xúc tác natri hydrid tạo các dẫn chất cis(+) và cis(−) N-alkyl hexahydro phthalazinon có tính kháng viêm. Trong thực nghiệm - Theo dõi phản ứng bằng sắc ký lớp mỏng. Sơ bộ tối ưu hóa đối với các phản ứng có hiệu suất thấp. - Tinh chế sản phẩm bằng sắc ký cột (SKC) và kết tinh lại. - Xác định cấu trúc bằng phổ IR, LC-MS và 1H-NMR. Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011 Chuyên Đề Dược Khoa 362 - Kiểm tra độ tinh khiết của sản phẩm bằng nhiệt độ nóng chảy, sắc ký lớp mỏng, sắc ký lỏng. - Kiểm tra độ tinh khiết quang học bằng góc quay cực riêng và sắc ký lỏng với pha tĩnh bất đối. Điều kiện sắc ký: Cột Lux Cellulose-1, 250 x 4,6 mm, 5µm (Phenomenex); bước sóng phát hiện: 317 nm; pha động: triethylamin 0,2% /n- hexan: triethylamin 0,2% /isopropanol (90:10); tốc độ dòng: 0,8 ml/phút; thể tích tiêm mẫu: 5µl; nhiệt độ cột: 30 oC. KẾT QUẢ Racemic cis-2-(3,4-dimethoxybenzoyl) cyclohexan carboxylic acid (2) Cho từ từ nhôm chlorid (8,01 g, 0,06 mol), 1,2-dimethoxybenzen (8,28 g, 0,06 mol) và anhydrid (9,24 g, 0,06 mol) vào bình cầu chứa sẵn dichloromethan lạnh (200 ml). Đun hồi lưu 8h ở nhiệt độ 55-65 OC. Cho hỗn hợp sau phản ứng vào hỗn hợp nước-đá, acid hóa bằng HCl 10%. Chiết bằng dichloromethan. Rửa dịch chiết bằng HCl 10%, nước, NaCl bão hòa, làm khan bằng Na2SO4. Cô quay loại dung môi, thu tủa. Kết tinh lại tủa trong diethylether/n-hexan. Tiến hành SKC với hệ dung môi n-hexan: ethyl acetat (5:1) thu được sản phẩm tinh khiết dạng kết tinh, màu trắng ngà. Hiệu suất 47% (8,2 g) cis(−)-2-(3,4-dimethoxybenzoyl)cyclohexan carboxylic acid (2a) Cho acid carboxylic dạng racemic (2) (3g, 0,01 mol), ethanol tuyệt đối (30 ml), R(+)-α- methylbenzylamin (1,24 g, 0,01 mol) vào bình cầu, khuấy trong 15 phút. Để yên 16 giờ, lọc thu tủa. Rửa tủa với ethanol tuyệt đối 2 lần, kết tinh lại trong ethanol nóng 2 lần. Acid hóa tủa bằng HCl 10%, chiết bằng dichloromethan. Rửa dịch chiết bằng HCl 10%, nước, NaCl bão hòa, làm khan bằng Na2SO4. Cô quay dịch chiết loại dung môi. Hiệu suất 39,33% (1,18 g). cis(+)-2-(3,4-dimethoxybenzoyl)cyclohexan carboxylic acid (2b) Cho acid carboxylic dạng racemic (2) (3g, 0,01 mol), ethanol tuyệt đối (30 ml), S(−)-α- methylbenzylamin (1,24 g, 0,01 mol) vào bình cầu, khuấy trong 15 phút. Để yên 16 giờ, lọc thu tủa. Rửa tủa với ethanol tuyệt đối 2 lần, kết tinh lại trong ethanol nóng 2 lần. Acid hóa tủa bằng HCl 10%, chiết bằng dichloromethan. Rửa dịch chiết bằng HCl 10%, nước, NaCl bão hòa, làm khan bằng Na2SO4. Cô quay dịch chiết loại dung môi. Hiệu suất 41% (1,23 g). cis(−)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)- 4a,5,6,7,8,8a-hexahydro-2H-phthalazin-1-on (3a) Cho acid carboxylic có tính quang hoạt (2a) (1,15 g, 3,94 mmol), hydrazin (3g, 0,06 mol) vào bình cầu chứa sẵn ethanol tuyệt đối (25 ml). Đun hồi lưu ở 130-140 oC trong 8 giờ. Cô quay hỗn hợp sau phản ứng, thu tủa cho vào hỗn hợp nước-đá, chiết bằng ethyl acetat. Rửa dịch chiết bằng nước cất, NaHCO3 10%, HCl 5%, NaCl bão hòa, làm khan bằng Na2SO4. Cô quay, thu tủa kết tinh lại trong cồn nóng, SKC với hệ dung môi n-hexan: ethyl acetat (3:2) thu sản phẩm tinh khiết dạng bột kết tinh trắng. Hiệu suất 80,2% (910 mg). [ ]20Dα : −387,44o (0,4%, CH3OH). m/z: 289,1 [M-H]+. cis(+)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)- 4a,5,6,7,8,8a-hexahydro-2H-phthalazin-1-on (3b) Thực hiện phản ứng đóng vòng acid carboxylic có tính quang hoạt (2b) (1,15 g, 3,94 mmol) tương tự như trên. Sản phẩm tinh khiết thu được có dạng bột kết tinh trắng. Hiệu suất 81,34% (923 mg). [ ]20Dα : +388,64o (0,4%, CH3OH). m/z: 289,1 [M-H]+. Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011 Nghiên cứu Y học Chuyên Đề Dược Khoa 363 cis(−)-2-heptyl-4-(3,4-dimethoxyphenyl)- 4a,5,6,7,8,8a-hexahydro-2H-phthalazin-1-on (4a ) Cho phthalazinon có tính quang hoạt (3a) (300 mg, 1,04 mmol) vào bình cầu chứa DMF (10 ml), khuấy đều. Sau đó cho NaH (60% trong dầu khoáng trắng, 30 mg, 1,25 mmol) vào khuấy trong 1 giờ. Tiếp tục thêm heptyl bromid (269 mg, 1,5 mmol) khuấy trong 6 giờ trong môi trường khí trơ ở nhiệt độ phòng. Cho hỗn hợp sau phản ứng vào nước cất lạnh, chiết bằng ethyl acetat. Rửa dịch chiết với nước cất, NaCl bão hòa, làm khan bằng Na2SO4. Cô quay thu tủa, tiến hành SKC với hệ dung môi ether dầu hỏa (60:90): ethyl acetat (10:1) thu sản phẩm tinh khiết có dạng bột mịn, màu trắng ngà, mùi hắc. Hiệu suất 77,11% (310 mg). Mp: 95-99 oC. IR (KBr) 1644 cm-1 (C=O), 1579 cm-1 (nhân thơm). m/z: 387,2 [M-H]+. [ ]20Dα : −381,73 o (0,4%, CHCl3). Độ tinh khiết quang học: 93,25 % ee. cis(+)-2-heptyl-4-(3,4-dimethoxyphenyl)- 4a,5,6,7,8,8a-hexahydro-2H-phthalazin-1-on (4c) Thực hiện phản ứng heptyl hóa phthalazinon (3b) (300 mg, 1,04 mmol) tương tự như trên. Sản phẩm tinh khiết thu được có dạng bột mịn, màu trắng ngà, mùi hắc. Hiệu suất 85,58% (340 mg). Mp: 95-99 oC. IR (KBr) 1644 cm-1 (C=O), 1579 cm-1 (nhân thơm). 1H NRM (500MHz, CDCl3) δ 0,857- 0,885 (t, 3H, CH3), 1,272-1,468 (m, 12 H, CH2), 1,161-2,572 (m, 7H, H5, H6, H7, H8), 3,040-3,084 (m, 1H, H8a), 3,703-3,758 (m, 1H, H8’), 3,916-3,941 (s, 6H, OCH3), 3,960-4,016 (m, 1H, H4a), 6,858- 6,875 (d, J = 8,5 Hz, 1H, H5-arom), 7,212-7,233 (dd, J = 2 Hz, 10,5 Hz, 1H, H6-arom), 7,471-7,475 (d, J = 2 Hz, 1H, H2-arom). m/z: 387,2 [M-H]+. [ ]20Dα : +381,40o (0,4%, CHCl3). Độ tinh khiết quang học: 88,43 % ee. cis(−)-2-benzyl-4-(3,4-dimethoxyphenyl)- 4a,5,6,7,8,8a-hexahydro-2H-phthalazin-1-on (4b) Thực hiện phản ứng benzyl hóa phthalazinon (3a) (300 mg, 1,04 mmol) tương tự như trên với benzyl bromid (257 mg, 1,5 mmol). Sản phẩm tinh khiết thu được có dạng bột kết tinh thô, màu vàng, mùi hắc. Hiệu suất 78% (307 mg). Mp: 87-99 oC. IR (KBr) 1668 cm-1 (C=O), 1574 cm-1 (nhân thơm). 1H NRM (500MHz, CDCl3) δ 1,281-1,800 (m, 7H, H5, H6, H7, H8), 2,563-2,581 (d, J = 9 Hz, 1H, H8a), 2,72 (s, 1H, H8’), 3,051-3,095 (m, 1H, H4a), 3,876-3,894 (t, 6H, OCH3), 4,916-4,945 (d, J = 14,5 Hz, 1H, CH2), 5,130-5,159 (d, J = 14,5 Hz, 1H, CH2), 6,829-6,846 (t, 1H, H5-arom), 7,182-7,202 (m, 1H, H6-arom), 7,221-7,261 (m, 1H, H2-arom), 7,286-7,442 (m, 5H, CH). m/z: 379,1 [M-H]+. [ ]20Dα : −307,98o (0,4%, CHCl3). Độ tinh khiết quang học: 94,42 % ee. cis(+)-2-benzyl-4-(3,4-dimethoxyphenyl)- 4a,5,6,7,8,8a-hexahydro-2H-phthalazin-1-on (4d) Thực hiện phản ứng benzyl hóa phthalazinon (3b) (300 mg, 1,04 mmol) tương tự như trên. Sản phẩm tinh khiết thu được có dạng bột kết tinh thô, màu vàng, mùi hắc. Hiệu suất 75,24% (296 mg). Mp: 87-99 oC. IR (KBr) 1668 cm- 1 (C=O), 1574 cm-1 (nhân thơm). m/z: 379,1 [M- H]+. [ ]20Dα : +303,23o (0,4%, CHCl3). Độ tinh khiết quang học: 88,34 % ee. KẾT LUẬN Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã tổng hợp được nguyên liệu và các sản phẩm trung gian tinh khiết để tổng hợp thành công các dẫn chất N-heptyl và N-benzyl của cis(+); cis(-)-4-(3,4- dimethoxyphenyl)hexahydro phthalazinon. Đồng thời xác định cấu trúc các sản phẩm tổng hợp được dựa vào nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực riêng, phổ IR, phổ MS, phổ 1H NRM. Từ kết quả thu được, chúng tôi sẽ tiếp tục nghiên cứu tổng hợp ra các hợp chất phthalazinon mới và Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011 Chuyên Đề Dược Khoa 364 tiến hành thử nghiệm khả năng kháng viêm in vivo của các dẫn chất tổng hợp được. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Dang Van Tinh, Jin CK, Miyamoto M, Ikee Y, Masuda T, Sano S, Shiro M, and Nagao Y (2006), “Pratical synthesis of new chiral cis-phthalazinones with potential for high phosphodiesterase (PDE4) inhibitory activity”, Heterocycles, 68 (10), pp. 2133-2144. 2. Van der May M., Boss H., Hatzelmann A., Van der Laan I. J., Sterk G. J., Thibaut U. and Timmerman H. (2002), “Novel selective PDE4 inhibitor. 3. In vivo antiinflammatory activity of a new series of N-substituted cis-tetra- and cis- hexahydrophthalazinones”, J. Med. Chem, 45, pp. 2520-2525. 3. Van der May, Boss M. H., Couwunberg D., Hatzelmann A., Sterk G. J., Goubitz K., Schenk H., and Timmerman H. (2002), J. Med. Chem, 45, pp. 2626. 4. Van der Mey M., Boss H., Couwenberg D., Hatzelmann A., Sterk G. J., Goubitz K., Schenk H., and Timmerman H. (2002), J. Med. Chem, 45, pp. 2526-2533. 5. Van der Mey M., Hatzelmann A., Van der Laan I.J., Sterk G.J., Thibaut U., and Timmerman H. (2001), “Novel Selective PDE4 Inhibitors. 1. Synthesis, Structure- Activity Relationships, and Molecular Modeling of 4-(3,4- dimethoxyphenyl)-2H-phthalazin-1-ones and Analogues”, J. Med. Chem, 44 (16), pp. 2511-2522. 6. Van der Mey M., Hatzelmann A., Van Klink G.P.M,Van der Laan I.J., Sterk G. J., Thibaut U., Ulrich W.R., and Timmerman H. (2001), “Novel Selective PDE4 Inhibitors. 2. Synthesis, Structure- Activity Relationships of 4-Aryl-Substituted cis- tetra- and cis-hexahydrophthalazinones”, J. Med. Chem, 44 (16), pp. 2523-2535.