Kĩ thuật vi sinh cơ bản

GV: Nguyễn Thị Ngọc Yến 3 cột điểm  Điểm 1: Vi sinh (B3)  Điểm 2: Ký sinh trùng (B4/B5)  Điểm 3: Thi (VS + KST)  Ống nghiệm  Que cấy  Đĩa petri  Môi trường • Cấy • Phân lập • Nhuộm Gram • Soi tiêu bản dưới kính hiển vi quang học  Chuyển vi khuẩn từ MT hiện tại sang MT khác  Mục đích:  Cấy chuyền: giữ giống  Tăng sinh  Khảo sát hình thái và tính chất sinh lý, sinh hóa  Kỹ thuật  Cấy trên thạch nghiêng  Cấy vào thạch đứng  Cấy vào thạch lỏng  Tách riêng các loài VSV từ quần thể ban đầu và đưa về dạng thuần khiết  Nguyên tắc  Trải hỗn hợp VK trên MT với mật độ giảm dần  Tb VK tách rời thành từng tb riêng rẽ  Ủ 37oC/24h, 1 tb rời rạc sẽ phát triển thành một khóm VK thuần chủng (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (9) (8) (10) (11) (12) Cách 1: chỉnh bằng VK 10X, sau đó chuyển qua 100X  VK 10X: Nâng bàn kính lên đến khi thấy thị trường  Nhỏ dầu cèdre vào tiêu bản  VK 100X: tinh chỉnh cho rõ Lưu ý: dầu không chạm VK 40X Cách 2: chỉnh trực tiếp bằng VK 100X • Nhỏ dầu cèdre vào tiêu bản • Nâng tiêu bản lên cao tối đa bằng ốc sơ cấp • Hạ dần bàn kính đến khi nhìn thấy thị trường lướt qua • Chỉnh ốc vi cấp ngược chiều đến khi thấy rõ thị trường  Tiến hành Trải vi khuẩn/ lame kính Nhuộm tím gentian Lugol (iod) 30s, rửa nước Tẩy = cồn 96o Nhuộm hồng fuschin 30s, rửa nước 30s, rửa nước Làm khô, soi KHV 30s, rửa nước     Thuốc nhuộm màu 1 Thuốc nhuộm màu 2 Tẩy màu Cố định màu Vết trải Trải vi khuẩn/ lame kính Nhuộm xanh methylene Làm khô, soi KHV >= 2 phút  Thao tác kỹ thuật cấy – phân lập từng cá nhân  Nhuộm màu VK  Nhuộm Gram: Staphylococcus aureus, E. coli  Nhuộm đơn: Corynebacterium diphtheriae  Sử dụng KHV theo 2 cách để quan sát  Tiêu bản nhuộm sẵn: Bacillus subtilis, Vibrio cholerae, Streptococcus faecalis  Tiêu bản SV tự nhuộm